Kromatografi lapis tipis adalah metode analisis kimia berdasarkan penggunaan lapisan sorben dengan ketebalan 0,1-0,5 mm sebagai fase diam. Metode KLT dapat digunakan di berbagai bidang dan memungkinkan penentuan berbagai macam senyawa kimia.
Prinsip metode
Metode kromatografi lapis tipis lahir dari kromatografi kertas dan percobaan pertama dilakukan pada tahun 80-an abad ke-19. Penggunaan aktif dari analisis ini dimulai hanya setelah tahun 1938.
Teknik KLT meliputi fase gerak (eluen), fase diam (sorben), dan analit. Fase diam diterapkan dan dipasang pada pelat khusus. Pelat dapat dibuat dari kaca, aluminium atau plastik - ini adalah substrat yang dapat digunakan kembali yang harus dicuci, dikeringkan, dan disiapkan untuk aplikasi sorben setelah setiap kali digunakan. Dimungkinkan juga untuk menggunakan piring kertas yang dibuang setelah digunakan.
Silica gel paling sering digunakan sebagai fase diam, tetapi dimungkinkan untuk menggunakan sorben lain, misalnya aluminium oksida. Saat menggunakan sorben ini atau itu, teknologi harus benar-benar diikuti agar hasilnya akurat, misalnya karena silika gel bisa memberikan hasil yang salah jika udara di laboratorium terlalu lembab.
Pelarut yang digunakan sebagai fase gerak, misalnya air, asam asetat, etanol, aseton, benzena. Pilihan pelarut harus diambil secara bertanggung jawab, karena hasil kromatografi secara langsung tergantung pada kualitasnya (viskositas, densitas, kemurnian). Pelarut individu dipilih untuk setiap sampel yang dianalisis.
Analisis
Sampel harus diencerkan dalam pelarut. Jika pelarutan sempurna tidak terjadi dan terlalu banyak pengotor yang tersisa, maka sampel dapat dibersihkan dengan ekstraksi.
Aplikasi sampel ke pelat dapat dilakukan secara otomatis atau manual. Aplikasi otomatis menggunakan metode microspray di mana setiap sampel disemprotkan ke area substrat yang sesuai. Untuk aplikasi manual, mikropipet digunakan. Tanda pensil ditempatkan di piring untuk setiap sampel. Setiap sampel diterapkan dengan kapiler ke pelat dalam satu garis pada jarak yang cukup dari tanda agar tidak bereaksi dengan karbon dari timbal.
Pelat ditempatkan dalam wadah, di bagian bawahnya dituangkan eluen. Penopang ditempatkan dengan satu sisi ke dalam bejana sampai ke garis yang ditandai. Bejana ditutup rapat untuk menghindari penguapan fase gerak. Di bawah aksi gaya kapiler, eluen mulai naik ke lapisan sorben. Ketika eluen mencapai tingkat tertentu, pelat dikeluarkan dari bejana dan dikeringkan.
Jika zat yang diinginkan tidak memiliki warna, maka tidak akan terlihat pada substrat. Oleh karena itu, visualisasi dilakukan - pemrosesan pelat dengan uap yodium atau pewarna lainnya.
Setelah pemrosesan tersebut, hasilnya dievaluasi. Area berwarna dengan intensitas bervariasi muncul pada sorben. Untuk menentukan suatu zat (atau sekelompok zat), area berwarna, ukuran, intensitas, dan mobilitasnya dibandingkan dengan sampel referensi.
Metode TLC banyak digunakan karena cepat, murah, akurat, intuitif, tidak memerlukan peralatan yang rumit, dan mudah diinterpretasikan.
